Diagnostic amélioré de la méningite à pneumocoques avec l’utilisation du test immunochromatographique Binax NOW de l’antigène de Streptococcus pneumoniae: une étude multisite

Contexte Un diagnostic étiologique précis de la méningite dans les pays en développement est nécessaire pour améliorer les soins cliniques et optimiser les stratégies de prévention des maladies. Les tests de culture et d’agglutination du liquide céphalo-rachidien sont actuellement les méthodes de diagnostic standard mais manquent de sensibilité. de l’antigène pneumococcique NOW Streptococcus pneumoniae Antigen Test; Binax, comparé à la culture, dans les pays pratiquant la surveillance de la méningite bactérienne en Afrique et en Asie. La plupart des échantillons de liquide céphalorachidien ont été prélevés chez des patients âgés de plusieurs mois.Résultats Un total d’échantillons de liquide céphalorachidien a été inclus. En utilisant des tests de culture et d’agglutination au latex seuls, des pneumocoques ont été détectés dans des échantillons provenant de% de patients en Asie et de% en Afrique. Les TIC ont augmenté la détection des pneumocoques, aboutissant à des taux d’identification similaires entre les sites, allant de% au Nigeria à% au Bangladesh La détection des TIC dans les échantillons provenant de cas négatifs pour la culture variait selon la région% en Afrique contre% en Asie; P & lt; utilisation antérieure d’antibiotiques% avec utilisation préalable d’antibiotiques vs% sans; P & lt; et WBC comptent% pour le nombre de globules blancs – cellules / mL,% pour – cellules / mL et% pour ⩾ cellules / mL; P & lt; par test de tendanceConclusions Les TIC ont procuré des avantages substantiels par rapport au test d’agglutination au latex et à la culture sur les sites asiatiques mais pas sur les sites africains Avec l’ajout des TIC, la proportion de cas de méningite attribuable aux pneumocoques était similaire en Asie et en Afrique. suggèrent que des études antérieures ont sous-estimé la proportion de cas de méningite bactérienne pédiatrique causée par le pneumocoque

Streptococcus pneumoniae ou pneumocoque est une cause majeure de méningite bactérienne dans le monde en développement , y compris la maladie épidémique récemment décrite en Afrique subsaharienne Des vaccins sûrs et efficaces contre la méningite à pneumocoques existent , et de nombreux pays en développement Introduire les vaccins dans un avenir proche Dans le cadre de l’introduction du vaccin, les pays surveilleront l’impact du vaccin sur divers résultats, y compris l’incidence de la méningite. En outre, dans la ceinture africaine de méningite, les patients suspectent une méningite bactérienne aiguë. chloramphénicol huileux préparation à action prolongée du chloramphénicol dans une suspension huileuse, recommandée par l’Organisation mondiale de la santé comme traitement de première intention de la méningite bactérienne présumée dans la ceinture africaine de la méningite pendant la saison épidémique de méningite, en supposant que le méningocoque Ce traitement est sous-optimal pour la méningite à pneumocoque Des tests étiologiques précis adaptés aux situations dans les pays en développement aideront à mesurer l’impact des vaccins et à améliorer les soins cliniques. L’identification fondée sur la culture des agents étiologiques responsables de la méningite bactérienne aiguë dans les pays en développement peut être peu sensible. traitement préalable avec antibiotiques, contamination des échantillons, manque de milieu de transport, retards de transport depuis les zones périphériques, disponibilité irrégulière des fournitures de laboratoire et difficultés de formation et de motivation du personnel de laboratoire La détection des antigènes dans les échantillons de LCR constitue un complément utile à la culture Le diagnostic à base d’agglutination au latex est largement utilisé, mais le test doit être interprété par un lecteur expérimenté et, par conséquent, n’est généralement pas consi Le test d’antigène NOW S pneumoniae Binax est un test immunochromatographique rapide in vitro pour la détection de l’antigène pneumococcique dans l’urine de patients adultes atteints de pneumonie. et dans le LCR de patients de tous âges atteints de méningite. L’outil a démontré une sensibilité et une spécificité élevées lors de tests de LCR chez des patients atteints de méningite confirmée par culture De plus, il était aussi sensible que la PCR. Bangladesh Dans cette étude, nous cherchions à évaluer la sensibilité et la spécificité des TIC chez les patients atteints de méningite sur des sites en Asie du Sud et en Afrique, afin de vérifier si les TIC augmentaient systématiquement le nombre de cas de pneumocoques détectés chez les patients méningés. ces paramètres et d’évaluer son utilité chez les patients et les patients sans traitement antimicrobien préalable

Méthodes

Population étudiée L’étude a été menée sur des sites de surveillance de la méningite bactérienne aiguë: Centre Hospitalier Universitaire Yalgado Ouédraogo, Ouagadougou, Burkina Faso; Centre Médical avec Antenne Chirurgicale, district de Kaya, Burkina Faso; Kilifi District Hospital, Kilifi, Kenya; University College Hospital, Ibadan, Nigéria; Hôpital de Dhaka Shishu, Dhaka, Bangladesh; Au moment de l’étude, le vaccin anti-Hib de Haemophilus influenzae de type b était utilisé pour la vaccination de routine des nourrissons uniquement au Kenya depuis et au Burkina Faso depuis janvier.

Tableau View largeDownload slideCaractéristiques du terrain des pays dans lesquels une évaluation du test immunochromatographique Binax NOW de l’antigène Streptococcus pneumoniae a été réaliséeTable View largeTélécharger les caractéristiques des pays dans lesquels une évaluation du test immunochromatographique Binax NOW de l’antigène Streptococcus pneumoniae a été réalisée Le Burkina Faso a recruté activement tous les patients soupçonnés de méningite bactérienne aiguë, quel que soit leur âge. Des procédures de laboratoire ont été réalisées chez tous les sujets de l ‘étude et ont été mises en culture en utilisant des méthodes standards. Procédures microbiologiques Les tests d’AL ont été réalisés selon les instructions du fabricant à l’aide des kits Pastorex Bio-Rad au Burkina Faso et Wellcogen S pneumoniae et H influenzae type b kits Remel au Bangladesh, au Kenya, au Nigéria et au Pakistan. l’obtention d’un traitement antimicrobien antérieur a été réalisée par plaquage d’une souche de Kocuria rhizophila; American Type Culture Collection sensible aux antibiotiques les plus communs sur des plaques de gélose au sang de mouton, plaçant un disque avec μL de CSF sur la pelouse bactérienne et mesurant le diamètre de l’inhibition de la croissance après une nuit d’incubation à ° C intoxication. La présence d’antibiotiques a été réalisée sur tous les échantillons de LCR avec un nombre de cellules leucocytaires / mL ou un résultat de culture positif. L’ICT consiste en un dispositif articulé dans lequel l’anticorps antipneumococcique de lapin est adsorbé sur une membrane de nitrocellulose Une deuxième série d’anticorps anti-pneumocoque de lapin est conjuguée à des particules d’or séchées sur un support fibreux inerte. Le technicien effectuant le test trempe un écouvillon dans l’échantillon de CSF et l’insère. dans le dispositif de test, ajoute un tampon de citrate pour faciliter le flux d’antigène, et ferme le dispositif Si l’antigène pneumococcique est présent dans le spe cimen, il se lie aux anticorps de lapin conjugués à l’or, et le complexe résultant est capturé par la bande d’IgG de lapin immobilisée, formant la ligne d’échantillon En outre, l’IgG de chèvre immobilisée capture l’excès d’anticorps de lapin conjugué, formant la ligne de contrôle. après min, avec l’apparition de seulement la ligne de contrôle indiquant un résultat de test négatif et l’apparition des lignes de contrôle et d’échantillon indiquant un résultat de test positifCes définitions La méningite bactérienne aiguë présumée était définie par la température de la fièvre, ⩾ ° C et ⩾ Signes méningés: convulsions, fontanelle bombée chez les enfants âgés de & lt; mois, raideur de la nuque, mauvaise succion, irritabilité, prostration, léthargie ou éruption pétéchiale ou purpura. Les échantillons de LCR avec un nombre de cellules leucocytaires / mL et l’aspect non perturbé étaient considérés comme anormaux mais non purulents. Le LCR purulent était défini par turbidité visuelle ou WBC. comptage ⩾ cellules / entrée de mLData et analyse Les données ont été saisies localement, ont été identifiées et envoyées au Plan de développement accéléré et d’introduction des vaccins antipneumococciques PneumoADIP à l’Université Johns Hopkins pour analyse Dans cet article, nous rapportons les données de patients ayant subi une ICT Nous avons calculé la proportion de spécimens testés positifs par culture ou AL, selon l’âge, l’utilisation antérieure d’antibiotiques et le site d’étude, et la proportion de spécimens testés positifs par les TIC, selon l’âge, les résultats de culture et les tests d’AL, Nombre de GB et site d’étude Nous avons utilisé χtests pour comparer les proportions entre les strates et définir un seuil de P = pour la signification statistique Toutes les analyses ont été effectuées en utilisant Stata, version Stata Corporation Problèmes éthiques Le LCR a été collecté dans le cadre des soins de routine; par conséquent, les pays n’ont pas besoin de consentement éclairé pour l’étude. Néanmoins, un consentement éclairé a été obtenu de tous les participants au Nigéria et une fiche d’information expliquant le but de l’étude a été fournie aux patients ou à leurs tuteurs au Burkina Faso. comités d’examen sur tous les sites et par le comité d’examen institutionnel Johns Hopkins Les trousses Binax NOW ont été fournies au PneumoADIP à un coût réduit par Binax; Dans le cas contraire, cette société n’a pas fourni de support d’étude et aucun membre du personnel de la société n’a eu accès aux données d’étude ou à des copies préliminaires du manuscrit.

Résultats

Caractéristiques démographiques et cliniques des patients Le recrutement a débuté au mois de mars au Bangladesh et en juillet dans tous les autres sites et s’est poursuivi jusqu’en juin. Tous les patients suspectés de méningite bactérienne et de numération leucocytaire ⩾ cellules / mL ou un résultat de culture positif ont été inclus dans l’étude. la quantité de liquide céphalo-rachidien restante après l’achèvement de tous les tests de routine était insuffisante pour les tests de dépistage des patients au Bangladesh, au Burkina Faso, au Nigéria et au Pakistan. Nous avons inclus des patients âgés de moins de 18 ans. ans: les patients au Bangladesh [%] âgés de & lt; ans, au Burkina Faso [%] ans & lt; ans, au Kenya [%] ans & lt; ans, au Nigéria tous âgés & lt; ans, et au Pakistan [%] ans & lt; ans Les nourrissons, c’est-à-dire, les patients âgés de & lt; l’année représentait% -% des enfants âgés de & lt; Le pourcentage de patients masculins inscrits était de% en général,% au Burkina Faso,% au Pakistan,% au Kenya,% au Nigeria et% Au Bangladesh, les inscriptions n’ont suivi aucune tendance saisonnière nette sur aucun des sites, sauf au Burkina Faso, qui se situe dans la ceinture africaine de la méningite et, conformément aux tendances historiques, a connu une forte augmentation des cas de décembre à avril. Faso, une majorité de patients avaient un nombre de globules blancs mL cellules / ml, tandis que sur les autres sites, la plupart des patients avaient un nombre de globules blancs (WBC) & lt; Nombre de cellules / ml Le pourcentage de spécimens de PPC purulentes variait de% au Bangladesh à% au Burkina Faso La distribution des nombres de GB était similaire pour tous les groupes d’âge dans tous les sites.

Figure Vue largeDownload slideDistribution de la numération leucocytaire dans les échantillons de LCR, par site, chez les personnes de tout âge présentant une suspicion de méningite bactérienne aiguë. Les chiffres sont donnés en cellules / mLFigure Voir grandDownloadDistribution de la numération leucocytaire dans les échantillons de LCR, par site, chez les personnes de tout âge présentant une suspicion de méningite bactérienne aiguë Les chiffres sont donnés en cellules / ml. La prévalence de l’utilisation antérieure d’antibiotiques, détectée par le test du LCR pour l’activité antimicrobienne, variait de% au Pakistan à% au Bangladesh et variait de% à% sur les sites africains. l’utilisation antérieure d’antibiotiques ne variait pas selon le groupe d’âge au Burkina Faso, au Nigéria ou au Pakistan. Elle était significativement plus élevée chez les nourrissons que chez les enfants plus âgés au Kenya% vs%; P = et Bangladesh% vs%; P & lt; Le pourcentage d’utilisation antérieure d’antibiotiques a augmenté avec l’augmentation du nombre de globules blancs au Bangladesh% pour le nombre de cellules leucocytaires / ml; % pour – cellules / mL; et% pour ⩾ cellules / mL; P =; Aucune culture significative n’a été trouvée sur d’autres sites. Résultats de culture CSF Des cultures de CSF,% étaient positives pour un organisme bactérien:% pour H influenzae,% pour S pneumoniae,% pour Neisseria meningitidis mais provenaient du Burkina Faso et% pour d’autres pathogènes Dans l’ensemble, les taux d’isolement culturel étaient de% chez les nourrissons pour les sites individuels,% -%,% chez les enfants âgés de – ans,% -%,% chez les enfants âgés de – ans et% chez les patients âgés de ⩾ ans Les taux les plus élevés ont été observés au Burkina Faso, où des taux élevés de méningite à méningocoques ont été observés de décembre à avril, coïncidant avec la saison épidémique de méningite. En Afrique,% des échantillons de LCR ont donné un agent étiologique par culture, comparé au% en Asie Pneumocoques par culture en% de spécimens du LCR en provenance d’Afrique et en% de spécimens du LCR en provenance d’Asie% et% chez les enfants âgés de & lt; années, respectivement; P & lt; table

Tableau View largeTélécharger slideCSF culture et l’agglutination au latex LA résultats chez les patients avec un test immunochromatographique effectué, par site et ageTable Voir grandTélécharger slideCSF culture et l’agglutination au latex LA résultats chez les patients avec un test immunochromatographique effectué, par site et l’âge

Tableau View largeTélécharger slideCSF culture, latex agglutination LA, et immunochromatographique test ICT résultats pour les patients avec un TIC effectuéTable View largeTélécharger slideCSF culture, agglutination au latex LA, et immunochromatographique test ICT résultats pour les patients avec un ICT performLA résultats des testsL’addition de tests LA considérablement augmenté Avec l’ajout des tests d’AL, les pneumocoques ont été identifiés dans% des échantillons de patients en Afrique et en% en Asie et% parmi les enfants âgés de moins de 10 ans. années, respectivement; P & lt; Tableau ICT versus culture Le pourcentage de patients avec un résultat ICT positif variait de% à%, selon le site géographique considéré P =, par test d’homogénéité avec la culture CSF comme standard de référence, l’ICT était positif pour%% CI,% -% de patients avec un résultat de culture positif pour pneumocoque et était négatif pour%% IC,% -% de patients avec un résultat de culture positif pour un autre pathogène Les TIC ont considérablement augmenté la détection de pneumocoques, comparé à l’utilisation de culture seule, en Asie sites mais pas sur les sites africains P & lt; Figure Les différences entre les régions étaient les plus fortes chez les patients avec un nombre de globules blancs élevé ⩾ cellules / mL ou sans utilisation préalable d’antibiotiques. Les TIC ont identifié les pneumocoques dans%% IC,% -% de spécimens CSF négatifs pour la culture; ce pourcentage variait selon l’utilisation antérieure d’antibiotiques% avec des antibiotiques antérieurs vs% sans; P & lt; région% en Afrique vs% en Asie; P & lt; et WBC comptent% pour le nombre de globules blancs – cellules / mL,% pour – cellules / mL et% pour ⩾ cellules / mL; P & lt ;, par test de tendance Les différences régionales persistent après la stratification par antécédents d’utilisation d’antibiotiques et de leucocytes. Parmi les patients ayant des résultats de culture négatifs et aucune utilisation antérieure d’antibiotiques, les TIC ont identifié les pneumocoques chez les enfants âgés de moins de 10 ans. années en Afrique et% en Asie P & lt; Les valeurs comparables pour les patients âgés de ⩾ ans étaient respectivement% et%, P & lt; Des tendances similaires ont été observées chez les patients ayant des résultats de culture négatifs et une utilisation antérieure d’antibiotiques, bien que les différences régionales ne soient statistiquement significatives pour aucun groupe d’âge avec des résultats positifs pour tous les âges,% en Afrique vs% en Asie; P = Parmi les patients avec des résultats de culture négatifs et des numérations leucocytaires de – cellules / mL, les résultats ICT étaient positifs pour% en Afrique et% en Asie P =, comparé à% en Afrique et% en Asie pour les patients avec un nombre de cellules leucocytaires. / mL P = et% en Afrique et% en Asie pour les patients avec un nombre de globules blancs ⩾ cellules / mL P & lt; Ces valeurs ne varient pas selon le groupe d’âge. Bien que les TIC identifient les pneumocoques dans un pourcentage croissant de spécimens de LCR négatifs pour la culture, le nombre absolu d’infections pneumococciques nouvellement identifiées ne varie pas en fonction du nombre de GB, en raison du plus grand nombre d’enfants. numération leucocytaire: les cas de méningite à pneumocoque ont été détectés dans le groupe avec un nombre de leucocytes / ml, comparé aux cas dans le groupe avec leucocytes – cellules / cellules / ml et cas dans le groupe avec leucocytose ⩾ cellules / mLICT versus LA Le résultat ICT était positif en% IC,% -% des cas avec un test LA positif pour pneumocoque et était négatif en% IC%,% -% des cas avec un test LA positif pour Hib, le méningocoque ou d’autres agents pathogènes. enfants âgés de & lt; ans,%% IC,% -% de cas LA-négatifs testés positifs par TIC en Afrique, comparé à%% IC,% -% en Asie P = Chez les enfants plus âgés – ans, ces valeurs étaient% en Afrique et% de l’Asie P = Trop peu d’adultes ont été enrôlés en Asie pour des comparaisons significatives dans ce groupe d’âgeSimilaire aux comparaisons des TIC avec la culture, des différences entre les régions ont été observées dans les comparaisons des TIC avec LA, indépendamment de l’utilisation antérieure d’antibiotiques ou de leucocytes. traitement antérieur avec des antibiotiques,% avec un résultat négatif de LA testé positif par les TIC en Afrique, comparé à% en Asie P =; Parmi les patients n’ayant pas reçu de traitement préalable par antibiotiques, ces valeurs étaient respectivement de% et%. P = Parmi les patients ayant un nombre de cellules leucocytaires / cellules leucocytaires,% de ceux en Afrique avec un résultat négatif ont un résultat positif. comparé à% en Asie P & lt ;; parmi les patients avec un nombre de leucocytes / mL, ces valeurs étaient respectivement de% et de%, alors que parmi les patients avec un nombre de leucocytes / mL, ces valeurs étaient respectivement de% et de%; Le pourcentage de spécimens LA négatifs qui ont été testés positifs par les TIC a augmenté avec l’augmentation du nombre de globules blancs dans le nombre de cellules leucocytaires / mL; % pour – cellules / mL; et% pour ⩾ cellules / mL; P & lt ;, par test de tendance Il n’y avait aucune différence dans la détection des cas par ICT chez les patients avec des résultats négatifs d’AL, en fonction de l’utilisation antérieure d’antibiotiques% pour l’utilisation antérieure d’antibiotiques contre% pour aucune utilisation antérieure d’antibiotiques; P =

Discussion

des caractéristiques environnementales, telles que l’utilisation du vaccin anti-Hib, la présence d’épidémies méningococciques, la prévalence d’autres syndromes semblables à la méningite et la prévalence du VIH. Les résultats indiquent qu’en Asie, où le test et la culture de l’AL ont échoué à identifier la majorité des cas de méningite à pneumocoques, les TIC jouent un rôle dans les évaluations de la charge de morbidité et de l’impact vaccinal, ainsi que dans la gestion clinique de la méningite. La proportion de spécimens négatifs pour la culture, de spécimens LA-négatifs et de tous les spécimens ayant un résultat ICT positif augmente avec l’augmentation du nombre de globules blancs dans le liquide céphalorachidien. que l’ICT identifie de véritables cas de pneumocoque et ne donne pas de résultats faussement positifs, ce qui est encore soutenu Malgré le pourcentage plus élevé d’échantillons de liquide céphalo-rachidien avec pneumocoques identifiés chez les patients avec un nombre de globules blancs plus élevé, notre étude a révélé que le nombre total de cas de pneumocoques identifiés est resté similaire pour tous les groupes de numération leucocytaire Les implications de cette constatation sont que les études portant uniquement sur la méningite purulente, habituellement définie par un nombre de cellules leucocytaires / mL, manqueront une part substantielle du fardeau des maladies pneumococciques. les TIC ont conduit à une augmentation de la proportion de spécimens testés positifs au pneumocoque chez les patients ayant un traitement antibiotique antérieur qui étaient supérieurs aux augmentations des patients sans traitement antibiotique préalable, indépendamment de la région. Les patients ayant reçu des antibiotiques avant la ponction lombaire sont moins susceptibles organismes viables dans leur LCR pour l’isolement par culture, ce qui améliore la valeur des Sur les sites africains, les TIC n’apportent que peu d’avantages par rapport à la culture, et le petit avantage disparaît avec l’ajout du test LA. L’utilité accrue des TIC en Asie suggère une sous-performance. Notre étude a été menée dans des centres urbains d’Asie où les enfants peuvent avoir accès à des soins, y compris la présentation à l’hôpital et la réception d’une ponction lombaire, plus tôt dans l’évolution de la maladie. Néanmoins, les différences dans la disponibilité, le calendrier, le type et le dosage des antibiotiques et l’observance du traitement par le patient peuvent conduire à des taux plus élevés d’antibiotiques dans les échantillons de LCR chez les patients. en Asie; l’étude actuelle n’a pas pu évaluer cette hypothèse Ces différences d’accès aux soins et les schémas d’utilisation des antibiotiques pourraient conduire à des charges antigéniques plus faibles en Asie, limitant la capacité de culture ou le test LA à détecter le pneumocoque. des sites dotés de bonnes installations de laboratoire et de microbiologistes hautement qualifiés, une majorité de cas peuvent actuellement être identifiés par des méthodes conventionnelles en Afrique, alors que des outils plus sensibles tels que les TIC sont nécessaires en Asie. Les études épidémiologiques en Afrique ont systématiquement documenté des taux élevés de méningites bactériennes confirmées en laboratoire [,, -], mais la plupart des études menées en Asie ont montré des taux très faibles [,,, ] Nos résultats suggèrent que les différences dans les taux d’incidence de la méningite bactérienne entre l’Asie et Afri Contrairement aux études de surveillance en Asie, les études vaccin-sonde, c’est-à-dire l’utilisation du vaccin dans un essai contrôlé randomisé pour évaluer le fardeau de la maladie, peuvent être dues à des méthodes de surveillance traditionnelles. plutôt que l’efficacité vaccinale menée en Indonésie et au Bangladesh a trouvé une incidence très élevée de méningite bactérienne. Par exemple, l’étude en Indonésie, en utilisant la conception de l’étude vaccin-sonde, a estimé une incidence de la méningite bactérienne Résultats du test d’AL et de la culture Notre étude met en lumière ces résultats Nous recommandons que les TIC soient utilisés comme un complément à la culture dans les projets de surveillance de la méningite pneumococcique en Asie, afin d’assurer une identification optimale des cas. Cependant, les TIC ne peuvent pas remplacer le test d’AL dans l’un ou l’autre de ces contextes, car test de kits LA disponibles dans le commerce pour le Hib et le méningocoque en plus du pneumocoque, particulièrement utile dans la ceinture africaine de la méningite

Remerciements

Nous remercions Faisal Imram, Désiré Ilboudo, Maxime Kienou, Régina Idohou, Shazia Azeem et Kirimi Anampiu pour leur aide à la collecte de données et à la gestion des données. Financement PneumoADIP à l’Université Johns Hopkins, entièrement financé par l’Alliance GAVI et le parrainage de Vaccine FundSupplement Cet article a été publié dans le cadre d’un supplément intitulé « Surveillance et détection coordonnées des pneumococcies et des infections à Hib dans les pays en développement », financé par PneumoADIP de l’Alliance GAVI de Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, Baltimore, Maryland. -L, LS et JM déclarent que l’Association pour l’aide à la médecine préventive AMP reçoit une part substantielle de financement pour l’ensemble de ses activités de Sanofi Pasteur, un fabricant de vaccins polysaccharidiques pneumococciques BDG, B-MNL, LS et JM sont affiliés à AMP, qui faisait également partie du réseau de surveillance PneumoADIP BDG et JM ont reçu des honoraires de réunion de GlaxoSmithKline, un fabricant ou un vaccin expérimental conjugué antipneumococcique Tous les autres auteurs: aucun conflit